EdU-Alexa Fluor 488细胞增殖检测试剂盒(适用于 FACS、FM)

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EdU-Alexa Fluor 488细胞增殖检测试剂盒(适用于 FACS、FM)

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产品描述 EdU-Alexa Fluor 488细胞增殖检测试剂盒(EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488)，是一种利用核苷渗入法对细胞增殖情况进行快速、简单、高灵敏检测的试剂盒。其原理为EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)是一种胸苷(T)类似物，EdU可以在在细胞周期的S期中替代胸苷掺入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能与叠氮化物(如荧光探针Alexa Fluor 488 Azide)通过Cu+的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Click reaction) 。通过点击反应，新合成的DNA会被绿色荧光标记，然后通过检测荧光信号实现细胞增殖的检测。细胞增殖检测是评估细胞活性、遗传毒性及抗肿瘤药物效果等的基础实验手段。细胞增殖检测的方法按照原理通常可以分为五类：膜损伤检测、代谢活性检测、ATP水平测定、DNA合成检测和细胞荧光标记检测法。目前公认的最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成，即核苷渗入法。以前常用的核苷渗入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸类似物)法，但BrdU法的缺点是需要变性DNA后才能与抗体结合，导致了DNA双链结构的破坏，影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。适用范围本试剂盒适用于培养的细胞或组织样品，也适用于组织切片，可以检测到细胞或组织样本中的单个增殖细胞，也可以对细胞或组织样本总体的细胞增殖情况进行定量分析。本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组份，同时提供了蓝色细胞核染料DAPI，可以用来复染所有细胞核，也可用于细胞周期分析。使用本试剂盒所做结果可以用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行检测，也可以用于高内涵筛选(High-Content Screening, HCS)。 EdU法的优点安全-----不使用[3H]thymidine，无放射性污染。简单-----基于小分子化学反应的检测方法，简单高效，仅需三步：EdU孵育；细胞固定；荧光检测。无需DNA变性和孵育抗体。快速-----无需过夜，省却抗原抗体反应。整个检测过程只需 2.5 小时，大大缩短实验周期。准确-----标记率高且无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免变性带来的样品损伤，确保细胞核边缘清晰完。灵敏-----无需抗体，检测染料仅为BrdU抗体的1/500，更容易扩散，即使单个增殖细胞也能准确检测。兼容-----对样品几乎无损伤，允许与多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征。包装说明针对6孔板培养的细胞（每孔500μl的Click反应液），小包装可以提供50个孔反应的量；大包装可以提供200个孔反应的量。针对96孔板培养的细胞（每孔50μl的Click反应液），小包装可以提供500个孔反应的量；大包装可以提供2000个孔反应的量（不同容器细胞Click反应液的具体用量可参考表1）。针对每管细胞数量为10-100万的流式细胞仪检测（每管500μl的Click反应液），小包装可以提供50管反应的量，大包装可以提供200管反应的量。针对冰冻或石蜡切片的检测（每个样品100-200μl的Click反应液），小包装可以提供125-250个样品反应的量，大包装可以提供500-1000个样品反应的量。光谱特性 488-Azide：绿色荧光，Ex/Em=491/518 nm；DAPI：蓝色荧光，Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。保存条件 -20℃保存，1年有效。488-Azide和DAPI(1000X)避光保存。仅供科学研究禁止用于临床诊断

产品概述

产品描述

EdU-Alexa Fluor 488细胞增殖检测试剂盒(EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488)，是一种利用核苷渗入法对细胞增殖情况进行快速、简单、高灵敏检测的试剂盒。其原理为EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)是一种胸苷(T)类似物，EdU可以在在细胞周期的S期中替代胸苷掺入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能与叠氮化物(如荧光探针Alexa Fluor 488 Azide)通过Cu+的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Click reaction) 。通过点击反应，新合成的DNA会被绿色荧光标记，然后通过检测荧光信号实现细胞增殖的检测。细胞增殖检测是评估细胞活性、遗传毒性及抗肿瘤药物效果等的基础实验手段。细胞增殖检测的方法按照原理通常可以分为五类：膜损伤检测、代谢活性检测、ATP水平测定、DNA合成检测和细胞荧光标记检测法。目前公认的最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成，即核苷渗入法。以前常用的核苷渗入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸类似物)法，但BrdU法的缺点是需要变性DNA后才能与抗体结合，导致了DNA双链结构的破坏，影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。

适用范围
本试剂盒适用于培养的细胞或组织样品，也适用于组织切片，可以检测到细胞或组织样本中的单个增殖细胞，也可以对细胞或组织样本总体的细胞增殖情况进行定量分析。本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组份，同时提供了蓝色细胞核染料DAPI，可以用来复染所有细胞核，也可用于细胞周期分析。使用本试剂盒所做结果可以用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行检测，也可以用于高内涵筛选(High-Content Screening, HCS)。

EdU法的优点

安全-----不使用[3H]thymidine，无放射性污染。

简单-----基于小分子化学反应的检测方法，简单高效，仅需三步：EdU孵育；细胞固定；荧光检测。无需DNA变性和孵育抗体。

快速-----无需过夜，省却抗原抗体反应。整个检测过程只需 2.5 小时，大大缩短实验周期。

准确-----标记率高且无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免变性带来的样品损伤，确保细胞核边缘清晰完。

灵敏-----无需抗体，检测染料仅为BrdU抗体的1/500，更容易扩散，即使单个增殖细胞也能准确检测。

兼容-----对样品几乎无损伤，允许与多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征。

包装说明

针对6孔板培养的细胞（每孔500μl的Click反应液），小包装可以提供50个孔反应的量；大包装可以提供200个孔反应的量。针对96孔板培养的细胞（每孔50μl的Click反应液），小包装可以提供500个孔反应的量；大包装可以提供2000个孔反应的量（不同容器细胞Click反应液的具体用量可参考表1）。针对每管细胞数量为10-100万的流式细胞仪检测（每管500μl的Click反应液），小包装可以提供50管反应的量，大包装可以提供200管反应的量。针对冰冻或石蜡切片的检测（每个样品100-200μl的Click反应液），小包装可以提供125-250个样品反应的量，大包装可以提供500-1000个样品反应的量。

光谱特性
488-Azide：绿色荧光，Ex/Em=491/518 nm；DAPI：蓝色荧光，Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。

保存条件

-20℃保存，1年有效。488-Azide和DAPI(1000X)避光保存。

仅供科学研究禁止用于临床诊断

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